塞来昔布联合NDGA通过p62/KEAP1在结直肠癌中诱导非经典、自噬非依赖性氧化还原细胞死亡

结直肠癌的瘤内异质性长期是治疗耐药的重要根源：在约40%的大肠肿瘤中可检出IGF2过表达、PIK3CA或PTEN改变等PI3K/AKT通路异常，KRAS突变的频率与之相当^[1]，驱动突变谱与凋亡能力的差异使疗法常常顾此失彼。与此同时，p62–KEAP1–NRF2轴被视为细胞氧化应激防御的中枢：p62过表达可阻断NRF2降解、促其入核并诱导HO-1与铁蛋白重链等基因转录，从而保护肝癌细胞免于铁死亡^[2]；自噬障碍时p62累积还能直接结合KEAP1，以非经典方式激活NRF2^[3]。问题在于，这条通路几乎总被解读为“促生存”，能否反过来把它撬动为跨基因型的杀伤策略，一直悬而未决。

本研究选用KRAS突变的HCT116与BRAF突变、p53状态不同的HT29来模拟瘤内异质性，检验塞来昔布联合NDGA（C+N）的作用。C+N对两株细胞均有强烈细胞毒性，且不依赖COX-2/5-LOX表达与凋亡能力；同时诱导线粒体ROS、脂质过氧化与不稳定亚铁离子累积，呈现JC-1绿色线粒体颗粒与FerroOrange红色铁颗粒。抗氧化剂NAC可逆转死亡，而凋亡、自噬、坏死性凋亡与铁死亡的抑制剂均不能，指向一种非经典、自噬无关的氧化还原性死亡。机制上，C+N诱导p62 Ser349磷酸化，促进KEAP1降解与NRF2稳定，该过程不依赖ULK1介导的自噬，但NRF2的稳定与HO-1诱导发生了解偶联。

这一结果改写了该轴的既有叙事。经典情境下NRF2活化伴随HO-1等靶基因上调并对抗铁死亡^[2]，本文中细胞虽出现铁与脂质过氧化特征、NRF2亦获稳定，却既不被铁死亡抑制剂拯救、也不诱导HO-1，说明其死亡有别于经典铁死亡^[2]；自噬障碍驱动的p62–KEAP1互作（位点定位于p62的349-DPSTGE-354基序^[3]）在此则让位于不依赖ULK1的磷酸化事件。作为对照，通过同时阻断NRF2与自噬、经p62-Keap1-Nrf2轴选择性杀伤“NRF2成瘾”结直肠癌细胞的L-硒代胱氨酸策略^[4]，与本文NRF2稳定仍难逃死亡的图景形成反差；而塞来昔布单药在骨肉瘤中曾被报道同时调节凋亡与自噬并引起G0/G1期阻滞^[5]，联合NDGA后反而绕开了这些通路。

当然，作为预印本，摘要层面留下的空白不少：NRF2为何被稳定却不能驱动HO-1转录、这种死亡的下游执行分子是什么均未阐明，证据也仅来自两株体外细胞系，尚无体内或临床数据。以氧化还原紊乱绕开基因型与凋亡能力的策略能否真正成立，仍有待后续工作验证。