表面化学决定 PEG 与两性离子 siRNA 纳米载体在原代巨噬细胞中的性别依赖性响应

聚乙二醇（PEG）长期占据核酸纳米载体表面修饰的主导地位，但其免疫原性问题日益凸显：抗PEG抗体可导致加速血液清除、药效下降乃至危及生命的过敏反应^[1]，还能通过补体激活破坏PEG化脂质纳米粒的完整性、引起载荷提前释放^[3]。两性离子聚合物因此被视为有希望的替代材料——两性离子凝胶包封可同时改善治疗蛋白的稳定性、药代动力学并降低免疫原性^[2]，羧基甜菜碱脂质能提升mRNA制剂疗效并缓解加速血液清除^[4]，羧基甜菜碱纳米凝胶也表现出长效循环特性^[5]。然而，此类比较大多依赖永生化细胞系，且普遍忽视性别变量：据本文作者检索，涉及性别差异的纳米颗粒研究占相关出版物不足0.1%，多数研究甚至不报告所用模型的性别。

针对这一缺口，作者以ARGET-ATRP合成了DMAEMA阳离子纳米粒，分别接枝CBMA、SBMA与PSBMA（后者经RAFT合成，分子量与PEG接枝物匹配），并以PEGMMA为参照，在原代雌、雄小鼠促炎性M1巨噬细胞中开展系统评价。四种载体粒径100–400 nm、PDI约0.2–0.4、表面电荷+10至+30 mV，聚合物类型与pH独立调节粒径和zeta电位（均P<0.0001），无交互作用；酸性条件下的溶胀设计旨在内体环境中促进释放与逃逸。生物相容性方面，50 μg/ml以下均被良好耐受；在125 μg/ml这一临界剂量，PEGMMA维持约90–120%代谢活性，而三种两性离子载体降至约40–70%，且雌性巨噬细胞低于雄性（P=0.0006）。值得注意的是，性别主效应仅见于两性离子制剂（CBMA P=0.045、SBMA P=0.0014、PSBMA P=0.028），PEGMMA则无性别差异。摄取实验中各制剂均实现siRNA胞内递送，唯PEGMMA在雌性细胞中摄取更高（P=0.0327）。

功能层面，LPS刺激M1巨噬细胞的TNF-α敲低呈现显著的性别×聚合物交互效应（P=0.0036）：PEGMMA在两性中敲低效果相当（P=0.9366），摄取的性别差异并未转化为功能差异；两性离子载体则表现出性别依赖的沉默效力，CBMA最为突出——雄性敲低88%，雌性仅32%（P=0.0009），PSBMA亦有显著性别差异（P=0.0427），且雌性细胞中CBMA的沉默效果明显逊于PEGMMA和PSBMA。这些发现把既往两性离子材料的整体优异表现^[2,4,5]细化到性别维度，表明表面化学决定了巨噬细胞应答是否存在性别依赖，两性离子替代物的功能等效性需按性别分别验证，而不能只看总体数据。

当然，本研究也有待完善之处：培养所用胎牛血清源于雌性激素背景，可能引入性别偏倚，结果需在含血清培养条件下解读；各制剂在粒径与电荷上的固有差异本身构成潜在混杂因素；性别差异背后的细胞膜相互作用或应激通路机制亦未直接检验，这些均有待后续研究澄清。