结构引导合理筛选鉴定靶向Bcl-2的多肽及其对结直肠癌细胞的抗增殖作用

B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）家族通过调控线粒体细胞色素c的释放而精密控制细胞凋亡，促生存与促凋亡蛋白之间的平衡向促生存一侧倾斜，是癌细胞逃避凋亡的公认机制^[1][2]。Bcl-2在约90%的结直肠腺癌中过表达，长期以来被视为有吸引力的抗癌靶点^[3]。在药物研发上，基于结构的计算筛选早在2001年就被用于寻找占据Bcl-2 BH3结合口袋的小分子抑制剂^[3]，这条路线经navitoclax的重新设计演进为选择性抑制剂ABT-199（venetoclax），后者单次给药即可在24小时内诱发难治性慢性淋巴细胞白血病患者的肿瘤溶解，同时避免了navitoclax因抑制Bcl-xL带来的血小板减少^[2]，sonrotoclax、lisaftoclax等后继药物也已进入临床评估^[1]。然而这些成功集中于血液系统肿瘤，venetoclax效力有限、难以在其他Bcl-2介导的恶性肿瘤中带来持久获益，长期用药后还出现G101V等耐药突变^[4]，结直肠癌中Bcl-2的高表达与其临床可靶向性之间仍存在明显落差^[3][4]，且现有策略以小分子模拟物、PROTAC和抗体偶联药物等为主^[1]。

在这一背景下，本研究以Bcl-2结构为出发点开展虚拟筛选，从肽库中获得四条候选肽。微量热泳动实验显示，Peptide-1对Bcl-2的表观结合能力最强，Kd为0.51 ± 0.03 μM，优于VS-9及其他筛选肽；分子动力学模拟、自由能形貌分析与MM/GBSA计算进一步支持了Bcl-2–Peptide-1复合物的预测构象特征。功能实验中，MTT检测表明Peptide-1显著抑制HT29和Colo320HSR两种结直肠癌细胞的增殖，而对正常结肠上皮细胞NCM460影响有限。敲低Bcl-2可削弱Peptide-1的活性，提示其作用具有靶点依赖性；RT-qPCR与ELISA分析则显示Peptide-1在转录和蛋白两个层面调节Bax/Bcl-2的表达。

相对早年针对Bcl-2口袋的小分子计算筛选^[3]，这项工作把结构导向的筛选逻辑延伸到肽类配体，而且证据链更为完整，从结合亲和力、复合物构象到细胞增殖表型与靶点依赖性均有覆盖。其功能终点落在Bax/Bcl-2平衡上，与结直肠癌中通过调节BCL-2/BAX介导抗肿瘤作用的已有药理学观察相互印证^[6]。在虚拟筛选能力持续增强、已能从数十亿规模的化合物库中快速获得微摩尔级配体的当下^[5]，这种“筛选—结合—结构—功能—靶点验证”的路径为实体瘤Bcl-2靶向提供了一个肽类起点。

当然，目前证据仍限于体外结合测定与细胞实验，摘要中未见动物药效数据、对Bcl-2家族其他成员（如Bcl-xL、Mcl-1）的选择性评估，也未涉及肽类稳定性与递送问题；Peptide-1能否在体内复现抗增殖效果，其引起的Bax/Bcl-2表达变化是否足以启动线粒体凋亡通路，均有待后续工作回答。