长读长测序如何改变质粒 QC（Addgene webinar）

Addgene webinar：质粒全长测序（long-read sequencing，PacBio/ONT）如何革新质粒 QC——从只查短段的 Sanger 走向"全质粒序列"，能发现短读长漏掉的结构变异。

• 背景：Addgene 2004 年成立时只能靠 Sanger 做 QC；Sanger 是引物依赖的靶向技术，只查设计已知的短段，严重依赖先验知识。
• 长读长价值：全长质粒测序可发现单碱基缺失（如 Cas9 基因中一个 bp 缺失即致功能丧失）、串联重复（如 8× EGFP 使短读长 de novo 组装只返回重复单元）等。
• 流程：对入库质粒测序并与预期序列比对；未验证质粒会导致重复实验、回头重克隆的时间浪费。
• 质量：长读长提供高单碱基质量与高深度，对需要精确序列的研究尤为重要。
• 定位：方法/质粒测序 QC（非 AI）；Tier E 方法教育频道。